Javascript איז דערווייַל פאַרקריפּלט אין דיין בלעטערער.ווען דזשאַוואַסקריפּט איז פאַרקריפּלט, עטלעכע פאַנגקשאַנז פון דעם וועבזייטל וועט נישט אַרבעטן.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez דעפּאַרטמענט פון וויסנשאַפֿט, סקין טעק פאַרמאַ גרופע, Castello D'Empúries, קאַטאַלאָניאַ, ספּאַין * די מחברים האָבן עטלעכע ינסייץ אין דעם ווערק Equal צושטייַער הינטערגרונט: היאַלוראָניק זויער (האַ) איז אַ געוויינטלעך אַקערז פּאַליסאַקערייד געניצט אין דער פּראָדוקציע פון דערמאַל פילערז פֿאַר עסטעטיש צוועקן.זינט עס האט אַ האַלב-לעבן פון עטלעכע טעג אין מענטשלעך געוועבן, HA-באזירט דערמאַל פילערז זענען כעמיש מאַדאַפייד צו פאַרברייטערן זייער לעבן אין דעם גוף.די מערסט פּראָסט מאָדיפיקאַטיאָן אין געשעפט האַ-באזירט פילערז איז די נוצן פון 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער (בדדע) ווי אַ קראָססלינקינג אַגענט צו קראָססלינק די האַ קייטן.רעזידענטשאַל אָדער אַנריאַקטיד BDDE איז גערעכנט ווי ניט-טאַקסיק ביי <2 פּאַרץ פּער מיליאָן (פּם);דעריבער, די ריזידזשואַל BDDE אין די לעצט דערמאַל פיללער מוזן זיין קוואַנטאַפייד צו ענשור פּאַציענט זיכערקייַט.מאַטעריאַלס און מעטהאָדס: דעם לערנען באשרייבט די דיטעקשאַן און כאַראַקטעריזיישאַן פון אַ ביי-פּראָדוקט פון די קרייַז-פֿאַרבינדונג אָפּרוף צווישן BDDE און HA אונטער אַלקאַליין טנאָים דורך קאַמביינינג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי (LC-MS).רעזולטאַטן: נאָך פאַרשידענע אַנאַליזעס, עס איז געפונען אַז די אַלקאַליין טנאָים און הויך טעמפּעראַטור געניצט צו דיסינפעקט די HA-BDDE הידראָגעל פּראַמאָוטאַד די פאָרמירונג פון דעם נייַ ביי-פּראָדוקט, די "פּראָפּילענע גלייקאָל-ווי" קאַמפּאַונד.LC-MS אַנאַליסיס באשטעטיקט אַז די ביי-פּראָדוקט האט די זעלבע מאָנאָיסטאָפּיק מאַסע ווי BDDE, אַ אַנדערש ריטענשאַן צייט (טר), און אַ אַנדערש ווו אַבזאָרבאַנס (λ = 200 נם) מאָדע.ניט ענלעך BDDE, עס איז באמערקט אין LC-MS אַנאַליסיס אַז אונטער די זעלבע מעזשערמאַנט טנאָים, דעם ביי-פּראָדוקט האט אַ העכער דיטעקשאַן קורס ביי 200 נם.מסקנא: די רעזולטאַטן אָנווייַזן אַז עס איז קיין עפּאַקסייד אין די סטרוקטור פון דעם נייַ קאַמפּאַונד.די דיסקוסיע איז אָפן צו אַססעסס די ריזיקירן פון דעם נייַ ביי-פּראָדוקט געפֿונען אין דער פּראָדוקציע פון HA-BDDE הידראָגעל (האַ דערמאַל פיללער) פֿאַר געשעפט צוועקן.טערמינען: היאַלוראָניק זויער, HA דערמאַל פיללער, קרייַז-לינגקט היאַלוראָניק זויער, BDDE, LC-MS אַנאַליסיס, BDDE ביי-פּראָדוקט.
פילערז באזירט אויף היאַלוראָניק זויער (האַ) זענען די מערסט פּראָסט און פאָלקס דערמאַל פילערז געניצט פֿאַר קאָסמעטיק צוועקן.1 דעם דערמאַל פיללער איז אַ הידראָגעל, יוזשאַוואַלי קאַמפּאָוזד פון> 95% וואַסער און 0.5-3% המגיד, וואָס גיט זיי אַ געל-ווי סטרוקטור.2 האַ איז אַ פּאַליסאַקערייד און דער הויפּט קאָמפּאָנענט פון די עקסטראַסעללולאַר מאַטריץ פון ווערטעבראַטעס.איינער פון די ינגרידיאַנץ.עס באשטייט פון (1,4)-גלוקוראָניק זויער-β (1,3)-ען-אַסעטילגלוקאָסאַמינע (גלקנאַק) ריפּיטינג דיסאַקשאַריד וניץ פארבונדן דורך גלייקאַסאַד קייטן.דעם דיסאַקשאַריד מוסטער איז די זעלבע אין אַלע אָרגאַניזאַמז.קאַמפּערד מיט עטלעכע פּראָטעין-באזירט פילערז (אַזאַ ווי קאַלאַגאַן), דעם פאַרמאָג מאכט HA אַ העכסט בייאָוקאַמפּאַטאַבאַל מאַלאַקיול.די פילערז קענען ויסשטעלונג אַמינאָ זויער סיקוואַנס ספּעסיפיקאַטי וואָס קען זיין אנערקענט דורך די פּאַציענט 'ס ימיון סיסטעם.
ווען געוויינט ווי אַ דערמאַל פיללער, די הויפּט באַגרענעצונג פון HA איז זיין גיך ויסקער אין די געוועבן רעכט צו דעם בייַזייַן פון אַ ספּעציפיש משפּחה פון ענזימעס גערופֿן היאַלוראָנידאַסעס.ביז איצט, עטלעכע כעמישער מאָדיפיקאַטיאָנס אין די האַ סטרוקטור זענען דיסקרייבד צו פאַרגרעסערן די האַלב-לעבן פון HA אין געוועבן.3 רובֿ פון די מאָדיפיקאַטיאָנס פּרווון צו רעדוצירן די אַקסעס פון היאַלוראָנידאַסע צו פּאַליסאַקערייד פּאָלימערס דורך קרייַז-לינקינג האַ קייטן.דעריבער, רעכט צו דער פאָרמירונג פון בריקן און די ינטערמאָלעקולאַר קאָוואַלענט קייטן צווישן די האַ סטרוקטור און די קרייַז-לינקינג אַגענט, די קראָס-לינגקט HA הידראָגעל טראגט מער אַנטי-ענזיים דערנידעריקונג פּראָדוקטן ווי די נאַטירלעך האַ.4-6
ביז איצט, די כעמישער קראָססלינקינג אגענטן געניצט צו פּראָדוצירן קראָססלינקעד האַ אַרייַננעמען מעטהאַקרילאַמידע, 7 כיידראַזידע, 8 קאַרבאָדיימידע, 9 דיוויניל סולפאָנע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער (בדדע) און פּאָלי(עטילענע גלייקאָל) דיגליסידיל יטער.10,11 BDDE איז דערווייַל די מערסט קאַמאַנלי געניצט קראָססלינקינג אַגענט.כאָטש די טייפּס פון הידראָגעלס האָבן שוין פּראָווען צו זיין זיכער פֿאַר דעקאַדעס, די קראָססלינקינג אגענטן זענען ריאַקטיוו ריידזשאַנץ וואָס קען זיין סיטאָטאָקסיק און, אין עטלעכע קאַסעס, מוטאַגעניק.12 דעריבער, זייער ריזידזשואַל אינהאַלט אין די לעצט הידראָגעל מוזן זיין הויך.BDDE איז גערעכנט ווי זיכער ווען די ריזידזשואַל קאַנסאַנטריישאַן איז ווייניקער ווי 2 פּאַרץ פּער מיליאָן (פּפּם).4
עס זענען עטלעכע מעטהאָדס צו דעטעקט נידעריק-רעזיד BDDE קאַנסאַנטריישאַן, קרייַז-לינקינג גראַד און סאַבסטיטושאַן שטעלע אין HA כיידראָדזשעלס, אַזאַ ווי גאַז קראָומאַטאַגראַפי, גרייס יקסקלוזשאַן קראָומאַטאַגראַפי קאַפּאַלד מיט מאַסע ספּעקטראָמעטרי (MS), יאָדער מאַגנעטיק אפקלאנג (NMR) פלואָרעססענסע מעזשערמאַנט מעטהאָדס, און דיאָדע מענגע קאַפּאַלד הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי (הפּלק).13-17 דעם לערנען באשרייבט די דיטעקשאַן און כאַראַקטעריזיישאַן פון אַ ביי-פּראָדוקט אין די לעצט קראָס-לינגקט האַ הידראָגעל געשאפן דורך די אָפּרוף פון BDDE און HA אונטער אַלקאַליין טנאָים.הפּלק און פליסיק קראָומאַטאַגראַפי-מאַסע ספּעקטראָמעטרי (LC-MS אַנאַליסיס).זינט די טאַקסיסאַטי פון דעם ביי-פּראָדוקט פון BDDE איז אומבאַקאַנט, מיר רעקאָמענדירן אַז זייַן רעזאַדו קוואַנטאַפאַקיישאַן זאָל זיין באשלאסן אין אַ ענלעך שטייגער צו דער אופֿן יוזשאַוואַלי געטאן אויף BDDE אין די לעצט פּראָדוקט.
די באקומען סאָדיום זאַלץ פון המגיד (שיסעידאָ קאָו, לטד., טאָקיאָ, יאַפּאַן) האט אַ מאָלעקולאַר וואָג פון ~ 1,368,000 דאַ (לאַורענט אופֿן) 18 און אַ ינטרינסיק וויסקאָסיטי פון 2.20 מ 3 / קג.פֿאַר די קראָססלינקינג אָפּרוף, BDDE (≥95%) איז געקויפט פון Sigma-Aldrich קאָו (סט. לאָויס, מאָ, USA).פאָספאַטע באַפערד סאַלין מיט ף 7.4 איז פּערטשאַסט פֿון Sigma-Aldrich פֿירמע.כל סאָלוואַנץ, אַסאַטאָוניטרילע און וואַסער געניצט אין די LC-MS אַנאַליסיס זענען פּערטשאַסט פֿון HPLC מיינונג קוואַליטעט.פאָרמיק זויער (98%) איז פּערטשאַסט ווי רייידזשאַנט מיינונג.
אַלע יקספּעראַמאַנץ זענען דורכגעקאָכט אויף אַ UPLC אַקקוויטי סיסטעם (וואַטערז, מילפאָרד, מאַ, USA) און קאָננעקטעד צו אַן אַפּי 3000 דרייַיק קוואַדרופּאָלע מאַסע ספּעקטראָמעטער יקוויפּט מיט אַן עלעקטראָספּריי ייאַנאַזיישאַן מקור (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
די סינטעז פון קראָס-לינגקט האַ כיידראָדזשאַלז איז סטאַרטעד דורך אַדינג 198 מג BDDE צו אַ 10% (וו / וו) סאָדיום היאַלוראָנאַטע (נאַהאַ) לייזונג אין דעם בייַזייַן פון 1% אַלקאַלי (סאָדיום כיידראַקסייד, נאַאָה).די לעצט BDDE קאַנסאַנטריישאַן אין דער אָפּרוף געמיש איז געווען 9.9 מג / מל (0.049 מם).דערנאָך, דער אָפּרוף געמיש איז ונ דורך געמישט און כאָומאַדזשאַנייזד און ערלויבט צו גיינ ווייַטער בייַ 45 ° C פֿאַר 4 שעה.19 די ף פון דער אָפּרוף איז מיינטיינד בייַ ~ 12.
דערנאָך, דער אָפּרוף געמיש איז געוואשן מיט וואַסער, און די לעצט האַ-בדדע הידראָגעל איז פילטערד און דיילוטאַד מיט פּבס באַפער צו דערגרייכן אַ האַ קאַנסאַנטריישאַן פון 10 צו 25 מג / מל, און אַ לעצט ף פון 7.4.כּדי צו סטעריליזירן די פּראָדוסעד קראָס-לינגקט האַ הידראָגעלס, אַלע די הידראָגעלס זענען אַוטאָקלאַוועד (120 ° C פֿאַר 20 מינוט).די פּיוראַפייד BDDE-HA הידראָגעל איז סטאָרד בייַ 4 ° C ביז אַנאַליסיס.
צו אַנאַלייז די BDDE פאָרשטעלן אין די קראָס-לינגקט האַ פּראָדוקט, אַ 240 מג מוסטער איז ווייד און ינטראָודוסט אין די צענטער לאָך (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; באַנד 0.5 מל) און סענטריפודזשד ביי 10,000 רפּם אין צימער טעמפּעראַטור 10 מינוט.א גאַנץ פון 20 μ ל פון ציען-אַראָפּ פליסיק איז געזאמלט און אַנאַלייזד.
אין סדר צו אַנאַלייז די BDDE נאָרמאַל (Sigma-Aldrich Co) אונטער אַלקאַליין טנאָים (1%, 0.1% און 0.01% NaOH), אויב די פאלגענדע טנאָים זענען באגעגנט, די פליסיק מוסטער איז 1:10, 1:100 אָדער אַרויף צו 1:100. 1:1,000,000 אויב נייטיק, נוצן MilliQ דייאָניזעד וואַסער פֿאַר אַנאַליסיס.
פֿאַר די סטאַרטינג מאַטעריאַלס געניצט אין די קרייַז-לינקינג אָפּרוף (HA 2%, H2O, 1% NaOH און 0.049 mm BDDE), 1 מל פון יעדער מוסטער צוגעגרייט פון די מאַטעריאַלס איז אַנאַלייזד מיט די זעלבע אַנאַליסיס טנאָים.
צו באַשטימען די ספּעציפֿישקייט פון די פּיקס אין די יאָן מאַפּע, 10 μL פון 100 PPB BDDE נאָרמאַל לייזונג (Sigma-Aldrich Co) איז צוגעגעבן צו די 20 μL מוסטער.אין דעם פאַל, די לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון די נאָרמאַל אין יעדער מוסטער איז 37 פּפּב.
ערשטער, צוגרייטן אַ BDDE לאַגער לייזונג מיט אַ קאַנסאַנטריישאַן פון 11,000 מג / ל (11,000 פּפּם) דורך דילוטינג 10 μל נאָרמאַל BDDE (Sigma-Aldrich Co) מיט 990 μL MilliQ וואַסער (געדיכטקייַט 1.1 ג / מל).ניצן דעם לייזונג צו צוגרייטן אַ 110 μg/L (110 ppb) BDDE לייזונג ווי אַ ינטערמידייט נאָרמאַל דיילושאַן.דערנאָך, נוצן די ינטערמידייט BDDE נאָרמאַל דילוענט (110 פּפּב) צו צוגרייטן די נאָרמאַל ויסבייג דורך דילוטינג די ינטערמידייט דילוענט עטלעכע מאָל צו דערגרייכן די געוואלט קאַנסאַנטריישאַן פון 75, 50, 25, 10 און 1 פּפּב.ווי געוויזן אין פיגורע 1, עס איז געפֿונען אַז די BDDE נאָרמאַל ויסבייג פון 1.1 צו 110 פּפּב האט אַ גוט לינעאַריטי (R2>0.99).דער נאָרמאַל ויסבייג איז ריפּיטיד אין פיר פרייַ יקספּעראַמאַנץ.
פיגורע 1 BDDE נאָרמאַל קאַלאַבריישאַן ויסבייג באקומען דורך LC-MS אַנאַליסיס, אין וואָס אַ גוט קאָראַליישאַן איז באמערקט (R2> 0.99).
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;LC-MS, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי.
אין סדר צו ידענטיפיצירן און קוואַנטיפיי די BDDE סטאַנדאַרדס פאָרשטעלן אין די קרייַז-לינגקט HA און די BDDE סטאַנדאַרדס אין די באַזע לייזונג, LC-MS אַנאַליסיס איז געניצט.
די טשראָמאַטאָגראַפיק צעשיידונג איז געווען אַטשיווד אויף אַ LUNA 2.5 μm C18 (2) -HST זייַל (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) און געהאלטן אין צימער טעמפּעראַטור (25 ° C) בעשאַס די אַנאַליסיס.די רירעוודיק פאַסע באשטייט פון אַסעטאָניטרילע (סאַלוואַנט א) און וואַסער (סאַלוואַנט ב) מיט 0.1% פאָרמיק זויער.די רירעוודיק פאַסע איז ילוייטיד דורך גראַדיענט ילושאַן.די גראַדיענט איז ווי גייט: 0 מינוט, 2% א;1 מינוט, 2% א;6 מינוט, 98% א;7 מינוט, 98% א;7.1 מינוט, 2% א;10 מינוט, 2% יי די פליסנדיק צייַט איז 10 מינוט און די ינדזשעקשאַן באַנד איז 20 μל.די ריטענשאַן צייט פון BDDE איז וועגן 3.48 מינוט (ריינדזשינג פון 3.43 צו 4.14 מינוט באזירט אויף יקספּעראַמאַנץ).די רירעוודיק פאַסע איז פּאַמפּט מיט אַ לויפן קורס פון 0.25 מל / מין פֿאַר LC-MS אַנאַליסיס.
פֿאַר BDDE אַנאַליסיס און קוואַנטאַפאַקיישאַן דורך MS, די UPLC סיסטעם (וואַטערז) איז קאַמביינד מיט אַן אַפּי 3000 דרייַיק קוואַדרופּאָלע מאַסע ספּעקטראָמעטער (AB SCIEX) יקוויפּט מיט אַן עלעקטראָספּריי ייאַנאַזיישאַן מקור, און די אַנאַליסיס איז דורכגעקאָכט אין positive יאָן מאָדע (ESI +).
לויט די יאָן פראַגמענט אַנאַליסיס געטאן אויף BDDE, די פראַגמענט מיט די העכסטן ינטענסיטי איז באשלאסן צו זיין די פראַגמענט קאָראַספּאַנדינג צו 129.1 דאַ (פיגורע 6).דעריבער, אין די מולטי-יאָן מאָניטאָרינג מאָדע (MIM) פֿאַר קוואַנטאַפאַקיישאַן, די מאַסע קאַנווערזשאַן (מאַסע-צו-באַשולדיקונג פאַרהעלטעניש [מ / ז]) פון BDDE איז 203.3/129.1 דאַ.עס אויך ניצט פול סקאַן (FS) מאָדע און פּראָדוקט יאָן יבערקוקן (PIS) מאָדע פֿאַר LC-MS אַנאַליסיס.
אין סדר צו באַשטעטיקן די ספּעציפֿישקייט פון דעם אופֿן, אַ ליידיק מוסטער (ערשט רירעוודיק פאַסע) איז אַנאַלייזד.קיין סיגנאַל איז געווען דיטעקטאַד אין די ליידיק מוסטער מיט אַ מאַסע קאַנווערזשאַן פון 203.3/129.1 דאַ.וועגן די ריפּיטאַביליטי פון דער עקספּערימענט, 10 נאָרמאַל ינדזשעקשאַנז פון 55 פּפּב (אין די מיטן פון די קאַלאַבריישאַן ויסבייג) זענען אַנאַלייזד, ריזאַלטינג אין אַ ריזידזשואַל נאָרמאַל דיווייישאַן (רסד) <5% (דאַטן ניט געוויזן).
די ריזידזשואַל BDDE אינהאַלט איז קוואַנטאַפייד אין אַכט פאַרשידענע אַוטאָקלאַוועד BDDE קראָס-לינגקט האַ הידראָגעלס, קאָראַספּאַנדינג צו פיר פרייַ יקספּעראַמאַנץ.ווי דיסקרייבד אין די אָפּטיילונג "מאַטעריאַל און מעטהאָדס", די קוואַנטאַפאַקיישאַן איז עוואַלואַטעד דורך די דורכשניטלעך ווערט פון די ראַגרעשאַן ויסבייג פון די BDDE נאָרמאַל דיילושאַן, וואָס קאָראַספּאַנדז צו די יינציק שפּיץ דיטעקטאַד ביי די BDDE מאַסע יבערגאַנג פון 203.3/129.1 דאַ, מיט אַ ריטענשאַן צייט פון 3.43 צו 4.14 מינוט ניט ווארטן.פיגורע 2 ווייזט אַ ביישפּיל קראָומאַטאַגראַם פון די 10 ppb BDDE רעפֿערענץ נאָרמאַל.טיש 1 סאַמערייזיז די ריזידזשואַל BDDE אינהאַלט פון אַכט פאַרשידענע הידראָגעלס.די ווערט קייט איז 1 צו 2.46 פּפּב.דעריבער, די ריזידזשואַל BDDE קאַנסאַנטריישאַן אין די מוסטער איז פּאַסיק פֿאַר מענטשלעך נוצן (<2 פּיפּיעם).
פיגורע 2 יאָן טשראָמאַטאָגראַם פון 10 ppb BDDE רעפֿערענץ נאָרמאַל (Sigma-Aldrich Co), MS (m / z) יבערגאַנג באקומען דורך LC-MS אַנאַליסיס פון 203.30 / 129.10 דאַ (אין positive מרם מאָדע).
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג;מיז, מאַסע;מ / ז, מאַסע-צו-באַשולדיקונג פאַרהעלטעניש.
באַמערקונג: סאַמפּאַלז 1-8 זענען אַוטאָקלאַוועד BDDE קראָס-לינגקט האַ הידראָגעלס.די ריזידזשואַל סומע פון BDDE אין די הידראָגעל און די שפּיץ פון BDDE ריטענשאַן צייט זענען אויך רעפּאָרטעד.צום סוף, די עקזיסטענץ פון נייַ פּיקס מיט פאַרשידענע ריטענשאַן צייט איז אויך געמאלדן.
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;האַ, היאַלוראָניק זויער;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג;tR, ריטענשאַן צייַט;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;RRT, קאָרעוו ריטענשאַן צייט.
סאַפּרייזינגלי, די אַנאַליסיס פון די LC-MS יאָן טשראָמאַטאָגראַם געוויזן אַז באזירט אויף אַלע די אַוטאָקלאַוועד קראָס-לינגקט HA הידראָגעל סאַמפּאַלז אַנאַלייזד, עס איז געווען אַן עקסטרע שפּיץ אין די קירצער ריטענשאַן צייט פון 2.73 צו 3.29 מינוט.למשל, פיגורע 3 ווייזט די יאָן טשראָמאַטאָגראַם פון אַ קרייַז-לינגקט HA מוסטער, ווו אַן נאָך שפּיץ איז ארויס אין אַ אַנדערש ריטענשאַן צייט פון בעערעך 2.71 מינוט.די באמערקט קאָרעוו ריטענשאַן צייט (ררט) צווישן די ניי באמערקט שפּיץ און די שפּיץ פון BDDE איז געווען 0.79 (טאַבלע 1).זינט מיר וויסן אַז די ניי באמערקט שפּיץ איז ווייניקער ריטיינד אין די C18 זייַל געניצט אין די LC-MS אַנאַליסיס, די נייַע שפּיץ קען שטימען צו אַ מער פּאָליאַר קאַמפּאַונד ווי BDDE.
פיגורע 3 יאָן קראָומאַטאַגראַם פון קרייַז-לינגקט האַ הידראָגעל מוסטער באקומען דורך לק-מס (מרם מאַסע קאַנווערזשאַן 203.3/129.0 דאַ).
אַבריווייישאַנז: המגיד, היאַלוראָניק זויער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג;ררט, קאָרעוו ריטענשאַן צייַט;tR, ריטענשאַן צייַט.
אין סדר צו ויסשליסן די מעגלעכקייט אַז די נייַ פּיקס באמערקט קען זיין קאַנטאַמאַנאַנץ ערידזשנאַלי פאָרשטעלן אין די רוי מאַטעריאַלס געניצט, די רוי מאַטעריאַלס זענען אויך אַנאַלייזד מיט דער זעלביקער LC-MS אַנאַליסיס אופֿן.די אַנאַלייזד סטאַרטינג מאַטעריאַלס אַרייַננעמען וואַסער, 2% NaHA אין וואַסער, 1% NaOH אין וואַסער און BDDE אין דער זעלביקער קאַנסאַנטריישאַן געניצט אין די קרייַז-פֿאַרבינדונג אָפּרוף.די יאָן טשראָמאַטאָגראַם פון די סטאַרטינג מאַטעריאַל האט נישט ווייַזן קיין קאַמפּאַונד אָדער שפּיץ, און זייַן ריטענשאַן צייט קאָראַספּאַנדז צו די נייַ שפּיץ באמערקט.דער פאַקט דיסקאַרדיד די געדאַנק אַז ניט בלויז די סטאַרטינג מאַטעריאַל קען אַנטהאַלטן קאַמפּאַונדז אָדער סאַבסטאַנסיז וואָס קען אַרייַנמישנ זיך מיט די אַנאַליסיס פּראָצעדור, אָבער עס איז קיין צייכן פון מעגלעך קרייַז-קאַנטאַמאַניישאַן מיט אנדערע לאַבאָראַטאָריע פּראָדוקטן.די קאַנסאַנטריישאַן וואַלועס באקומען נאָך LC-MS אַנאַליסיס פון BDDE און נייַ פּיקס זענען געוויזן אין טאַבלע 2 (סאַמפּאַלז 1-4) און די יאָן טשראָמאַטאָגראַם אין פיגורע 4.
באַמערקונג: סאַמפּאַלז 1-4 שטימען צו די רוי מאַטעריאַלס געניצט צו פּראָדוצירן אַוטאָקלאַוועד BDDE קראָס-לינגקט HA הידראָגעלס.די סאַמפּאַלז זענען נישט אַוטאָקלאַוועד.
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;האַ, היאַלוראָניק זויער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג.
פיגורע 4 קאָראַספּאַנדז צו די LC-MS טשראָמאַטאָגראַם פון אַ מוסטער פון די רוי מאַטעריאַל געניצט אין די קרייַז-לינקינג אָפּרוף פון HA און BDDE.
באַמערקונג: אַלע פון די זענען געמאסטן אין דער זעלביקער קאַנסאַנטריישאַן און פאַרהעלטעניש געניצט צו דורכפירן די קרייַז-לינקינג אָפּרוף.די נומערן פֿאַר די רוי מאַטעריאַלס אַנאַלייזד דורך די טשראָמאַטאָגראַם שטימען צו: (1) וואַסער, (2) 2% האַ ייקוויאַס לייזונג, (3) 1% נאַאָה ייקוויאַס לייזונג.LC-MS אַנאַליסיס איז דורכגעקאָכט פֿאַר מאַסע קאַנווערזשאַן פון 203.30/129.10 דאַ (אין positive MRM מאָדע).
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;האַ, היאַלוראָניק זויער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג.
ד י באדינגונגע ן װא ס האב ן געפיר ט צ ו דע ר פאָרמירונג ן פו ן נײ ע שפיצן , זײנע ן גע ־ שטודיר ט געװארן .אין סדר צו לערנען ווי די אָפּרוף טנאָים געניצט צו פּראָדוצירן די קראָס-לינגקט HA הידראָגעל ווירקן די ריאַקטיוואַטי פון די BDDE קראָס-לינקינג אַגענט, לידינג צו די פאָרמירונג פון נייַ פּיקס (מעגלעך ביי-פּראָדוקטן), פאַרשידענע מעזשערמאַנץ זענען דורכגעקאָכט.אין די דיטערמאַניישאַנז, מיר געלערנט און אַנאַלייזד די לעצט BDDE קראָססלינקער, וואָס איז געווען באהאנדלט מיט פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַנז פון נאַאָה (0%, 1%, 0.1% און 0.01%) אין אַ ייקוויאַס מיטל, נאכגעגאנגען דורך אָדער אָן אַוטאָקלאַווינג.דער פּראָצעדור פון באַקטיריאַ צו סימולירן די זעלבע טנאָים איז די זעלבע ווי דער אופֿן געניצט צו פּראָדוצירן די קרייַז-לינגקט HA הידראָגעל.ווי דיסקרייבד אין די "מאַטעריאַלן און מעטהאָדס" אָפּטיילונג, די מאַסע יבערגאַנג פון די מוסטער איז אַנאַלייזד דורך LC-MS צו 203.30/129.10 דאַ.די BDDE און די קאַנסאַנטריישאַן פון די נייַ שפּיץ זענען קאַלקיאַלייטיד, און די רעזולטאַטן זענען געוויזן אין טאַבלע 3. קיין נייַ פּיקס זענען דיטעקטאַד אין די סאַמפּאַלז וואָס זענען נישט אַוטאָקלאַוועד, ראַגאַרדלאַס פון די בייַזייַן פון נאַאָה אין די לייזונג (סאַמפּאַלז 1-4, טיש. 3).פֿאַר אַוטאָקלאַוועד סאַמפּאַלז, נייַ פּיקס זענען דיטעקטאַד בלויז אין דעם בייַזייַן פון נאַאָה אין די לייזונג, און די פאָרמירונג פון די שפּיץ מיינט צו אָפענגען אויף די נאַאָה קאַנסאַנטריישאַן אין די לייזונג (סאַמפּאַלז 5-8, טאַבלע 3) (ררט = 0.79).פיגורע 5 ווייזט אַ ביישפּיל פון אַ יאָן טשראָמאַטאָגראַם, ווייַזונג צוויי אַוטאָקלאַוועד סאַמפּאַלז אין דעם בייַזייַן אָדער אַוועק פון NAOH.
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג.
באַמערקונג: די שפּיץ טשראָמאַטאָגראַם: דער מוסטער איז באהאנדלט מיט 0.1% נאַאָה ייקוויאַס לייזונג און אַוטאָקלאַוועד (120 ° C פֿאַר 20 מינוט).דנאָ טשראָמאַטאָגראַם: דער מוסטער איז נישט באהאנדלט מיט נאַאָה, אָבער אַוטאָקלאַוועד אונטער די זעלבע באדינגונגען.די מאַסע קאַנווערזשאַן פון 203.30 / 129.10 דאַ (אין positive MRM מאָדע) איז אַנאַלייזד דורך LC-MS.
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג.
אין אַלע אַוטאָקלאַוועד סאַמפּאַלז, מיט אָדער אָן נאַאָה, די BDDE קאַנסאַנטריישאַן איז זייער רידוסט (אַרויף צו 16.6 מאל) (סאַמפּאַלז 5-8, טאַבלע 2).די פאַרקלענערן אין BDDE קאַנסאַנטריישאַן קען זיין רעכט צו דעם פאַקט אַז אין הויך טעמפּעראַטורעס, וואַסער קענען שפּילן ווי אַ באַזע (נוקלעאָפילע) צו עפֿענען די עפּאַקסייד רינג פון BDDE צו פאָרעם אַ 1,2-דיאָל קאַמפּאַונד.די מאָנאָיסאָטאָפּיק קוואַליטעט פון דעם קאַמפּאַונד איז אַנדערש פון די פון BDDE און דעריבער וועט נישט זיין אַפעקטאַד.LC-MS דיטעקטאַד אַ מאַסע יבעררוק פון 203.30/129.10 דאַ.
צום סוף, די יקספּעראַמאַנץ ווייַזן אַז די דור פון נייַ פּיקס דעפּענדס אויף דעם בייַזייַן פון BDDE, NAOH און די אַוטאָקלאַווינג פּראָצעס, אָבער האט גאָרנישט צו טאָן מיט HA.
דער נייַ שפּיץ געפֿונען אין אַ ריטענשאַן צייט פון בעערעך 2.71 מינוט איז דעמאָלט קעראַקטערייזד דורך LC-MS.פֿאַר דעם צוועק, BDDE (9.9 מג / מל) איז ינגקיובייטיד אין אַ 1% נאַאָה ייקוויאַס לייזונג און אַוטאָקלאַוועד.אין טאַבלע 4, די קעראַקטעריסטיקס פון די נייַ שפּיץ זענען קאַמפּערד מיט די באַוווסט BDDE רעפֿערענץ שפּיץ (ריטענשאַן צייט בעערעך 3.47 מינוט).באַזירט אויף די יאָן פראַגמאַנטיישאַן אַנאַליסיס פון די צוויי פּיקס, עס קענען זיין געפונען אַז דער שפּיץ מיט אַ ריטענשאַן צייט פון 2.72 מינוט ווייזט די זעלבע פראַגמאַנץ ווי די BDDE שפּיץ, אָבער מיט פאַרשידענע ינטענסיטיז (פיגורע 6).פֿאַר די שפּיץ קאָראַספּאַנדינג צו די ריטענשאַן צייט (PIS) פון 2.72 מינוט, אַ מער טיף שפּיץ איז באמערקט נאָך פראַגמאַנטיישאַן אין אַ מאַסע פון 147 דאַ.אין די BDDE קאַנסאַנטריישאַן (9.9 מג / מל) געניצט אין דעם פעסטקייַט, פאַרשידענע אַבזאָרבאַנס מאָדעס (UV, λ = 200 נם) אין די אַלטראַווייאַליט ספּעקטרום זענען אויך באמערקט נאָך קראָומאַטאַגראַפיק צעשיידונג (פיגורע 7).דער שפּיץ מיט אַ ריטענשאַן צייט פון 2.71 מינוט איז נאָך קענטיק ביי 200 נם, בשעת די BDDE שפּיץ קענען ניט זיין באמערקט אין די קראָומאַטאַגראַם אונטער די זעלבע באדינגונגען.
טאַבלע 4 כאַראַקטעריזיישאַן רעזולטאַטן פון די נייַע שפּיץ מיט אַ ריטענשאַן צייט פון וועגן 2.71 מינוט און די BDDE שפּיץ מיט אַ ריטענשאַן צייט פון 3.47 מינוט
באַמערקונג: צו באַקומען די רעזולטאַטן, LC-MS און HPLC אַנאַליזעס (MRM און PIS) זענען דורכגעקאָכט אויף די צוויי פּיקס.פֿאַר HPLC אַנאַליסיס, UV דיטעקשאַן מיט אַ ווייוולענגט פון 200 נם איז געניצט.
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;הפּלק, הויך פאָרשטעלונג פליסיק קראָומאַטאַגראַפי;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג;מ / ז, מאַסע-צו-באַשולדיקונג פאַרהעלטעניש;PIS, פּראָדוקט יאָן סקאַנינג;אַלטראַווייאַליט ליכט, אַלטראַווייאַליט ליכט.
באַמערקונג: די מאַסע פראַגמאַנץ זענען באקומען דורך LC-MS אַנאַליסיס (PIS).שפּיץ טשראָמאַטאָגראַם: מאַסע ספּעקטרום פון BDDE נאָרמאַל מוסטער פראַגמאַנץ.דנאָ טשראָמאַטאָגראַם: די מאַסע ספּעקטרום פון די נייַ שפּיץ דיטעקטאַד (ררט פֿאַרבונדן מיט די BDDE שפּיץ איז 0.79).BDDE איז פּראַסעסט אין 1% נאַאָה לייזונג און אַוטאָקלאַוועד.
אַבריווייישאַנז: בדדע, 1,4-בוטאַנעדיאָל דיגליסידיל יטער;לק-מס, פליסיק קראָומאַטאַגראַפי און מאַסע ספּעקטראָמעטרי;MRM, קייפל אָפּרוף מאָניטאָרינג;PIS, פּראָדוקט יאָן יבערקוקן;RRT, קאָרעוו ריטענשאַן צייט.
פיגור 7 יאָן קראָומאַטאַגראַם פון די 203.30 דאַ פּריקערסער יאָן, און (א) די נייַ שפּיץ מיט אַ ריטענשאַן צייט פון 2.71 מינוט און (ב) די ווו דיטעקשאַן פון די BDDE רעפֿערענץ נאָרמאַל שפּיץ ביי 3.46 מינוט ביי 200 נם.
אין אַלע די קראָס-לינגקט האַ הידראָגעלס געשאפן, עס איז באמערקט אַז די ריזידזשואַל BDDE קאַנסאַנטריישאַן נאָך LC-MS קוואַנטאַפאַקיישאַן איז <2 פּפּם, אָבער אַ נייַ אומבאַקאַנט שפּיץ ארויס אין די אַנאַליסיס.דער נייַע שפּיץ איז נישט פּאַסיק פֿאַר די BDDE נאָרמאַל פּראָדוקט.די BDDE נאָרמאַל פּראָדוקט האט אויך אַנדערגאָן די זעלבע קוואַליטעט קאַנווערזשאַן (MRM קאַנווערזשאַן 203.30/129.10 דאַ) אַנאַליסיס אין די positive MRM מאָדע.אין אַלגעמיין, אנדערע אַנאַליסיס מעטהאָדס אַזאַ ווי קראָומאַטאַגראַפי זענען געניצט ווי לימיט טעסץ צו דעטעקט BDDE אין הידראָגעלס, אָבער די מאַקסימום דיטעקשאַן שיעור (LOD) איז אַ ביסל נידעריקער ווי 2 פּיפּיעם.אויף די אנדערע האַנט, ביז איצט, NMR און MS האָבן שוין געניצט צו קעראַקטערייז די גראַד פון קרייַז-לינקינג און / אָדער מאָדיפיקאַטיאָן פון HA אין די צוקער אַפּאַראַט פראַגמאַנץ פון קראָס-לינגקט HA פּראָדוקטן.דער ציל פון די טעקניקס איז קיינמאָל געווען צו קוואַנטיפיצירן ריזידזשואַל BDDE דיטעקשאַן אין אַזאַ נידעריק קאַנסאַנטריישאַנז ווי מיר באַשרייַבן אין דעם אַרטיקל (LOD פון אונדזער LC-MS אופֿן = 10 ppb).
פּאָסטן צייט: סעפטעמבער 01-2021